作者:佚名 來源于:學習力教育中心
用放射性同位素或熒光物質標記的特異DNA或RNA分子,通過分子雜交技術檢測與之互補的核苷酸順序的技術。核酸分子探針的制備方法有以下幾種:
缺口移位標記 DNA水解酶I能夠使雙鏈DNA分子產(chǎn)生缺口。DNA聚合酶能將缺口從5′→3′方向擴大,同時將5′端的核苷酸切除,此酶還同時具有5′→3′聚合功能,在有4種單核苷酸(dNTP)的反應系統(tǒng)中將切去的核苷酸補上。缺口沿著DNA的另一條鏈位移,同時有放射性的核苷酸就會摻入DNA分子中,成為有高比放性的DNA探針。一般單核苷酸標記的摻入量30%,比放性可達108cpm/μg DNA。
T4DNA聚合酶標記 T4 DNA聚合酶有核酸外切酶作用,在沒有dNTP的條件下,從3′→5′切除核苷 ......
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